叠氮化钠去除实验

         叠氮化钠（Sodium Azide）是一种常用的防腐剂，用于防止抗体溶液中的细菌和真菌污染。然而，叠氮化钠具有细胞毒性，会干扰抗体偶联反应，并抑制辣根过氧化物酶（HRP）等酶的活性。因此，在某些实验中（如细胞培养、抗体偶联等），需要去除抗体溶液中的叠氮化钠。

         阿拉丁许多抗体产品含有叠氮化钠，其信息在各自的产品说明书中提供。如果抗体用于细胞培养检测或偶联，建议从抗体溶液中去除叠氮化钠。或者，也可以选择我们无载体的重组抗体，这些抗体不含 BSA、叠氮化钠和甘油，可直接使用。

         本文将介绍三种常用的去除叠氮化钠的方法。

方法1   透析法

         透析是一种利用半透膜分离小分子和大分子的方法。叠氮化钠的分子量为65 Da，而抗体（如IgG）的分子量约为150 kDa，因此可以通过透析去除叠氮化钠。

         透析装置一般具有多种尺寸和孔径可供选择。这里我们根据需要分离的分子大小，使用孔径截留为10-30 kDa的膜，使叠氮化物透过膜，同时保留溶液钟的抗体和其他蛋白质。

1.按照制造商的建议组装透析装置，并用透析缓冲液预润湿透析膜1-2分钟。

2.将需要去除叠氮化钠的抗体溶液转移到透析装置中。

3.将透析装置放入一个大烧杯中，往烧杯中添加至少1 L缓冲液。

4.将烧杯放在磁力搅拌器上，4°C下透析至少1小时。

5.更换烧杯中的缓冲液，再次透析至少1小时，重复至少3次。

方法2   脱盐法

         脱盐法（Desalting）的核心原理是尺寸排阻色谱（Size Exclusion Chromatography, SEC），也称为凝胶过滤色谱。这种方法利用凝胶颗粒的孔隙结构，根据分子大小对不同物质进行分离。

         尺寸排阻色谱（SEC）使用的是具有多孔结构的凝胶颗粒，如Sephadex G25。这些颗粒的孔隙大小是固定的，通常用于分离分子量范围在几百到几千道尔顿的分子。

         抗体等大分子由于分子量较大，无法进入凝胶颗粒的孔隙内部，因此在通过凝胶柱时，它们主要在凝胶颗粒之间的间隙中移动。由于路径较短，大分子会较快地通过色谱柱，最先被洗脱出来。

         小分子（如叠氮化钠）：由于分子量较小，能够进入凝胶颗粒的孔隙内部。因此，在通过凝胶柱时，它们需要经过更长的路径，洗脱速度较慢，最后被洗脱出来。

         Sephadex G25的孔隙大小正好适合分离小分子（如叠氮化钠，分子量65 Da）和大分子（如抗体，分子量约150 kDa），可有效去除抗体样品中的叠氮化钠。

         如果使用商业化的纯化柱，请参考制造商的说明书，其他情况下，可参考以下步骤进行操作。

1.打开旋转柱的盖子，以 1,000 ×g 的速度离心2分钟，以去除储存溶液。

2.将柱子转移至收集管中。

3.按照制造商的建议，将平衡缓冲液注入柱中，然后以 1,000 ×g 的速度离心 2 分钟。

4.重复3次，弃去收集的流出液。 

5.将1-3 mL抗体样品缓慢加入到纯化柱的中间，以1,000 ×g离心2分钟。

6.收集洗脱液（抗体）。

方法3   抗体纯化试剂盒  

         直接购买商业化的抗体纯化试剂盒，并严格按照试剂盒说明书来进行操作。

         如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

            https://www.aladdin-e.com