组织块整体免疫组织化学染色 实验方案和技巧

       组织块整体染色是对小块组织（通常是胚胎）进行染色，无需切片。

       组织块整体染色与免疫细胞化学（ICC）或冷冻切片染色（IHC-Fr）非常相似。如果抗体已成功用于冷冻切片（这不包括石蜡包埋切片），则该抗体应该适用于整个胚胎。

       不同之处在于，被染色的样品比载玻片上的正常切片更大、更厚。因此，固定剂、封闭缓冲液、抗体、洗涤缓冲液、透化和底物显色的孵育需要更长的时间，以允许透化直接进入样品中心。

       这些步骤所需的时间需要针对您的实验进行优化，但这些实验步骤中的详细信息可以为您提供一些指导。

第一阶段  固定

       无论您在冷冻切片免疫组化的抗体孵育过程中使用了什么固定剂，只要试验成功了，这个固定剂都可以用于此实验。不过，大多数研究人员常用4%的多聚甲醛（PFA）（例如，P395744）。

       PFA的浓度非常低，必须让整个安装样品在PFA中浸泡很长一段时间，帮助PFA透化到样品的中心。因此，这并不适合所有抗体，因为固定剂形成的蛋白质交联可能会阻止抗体接近表位。

       通常，在石蜡切片免疫组化（IHC-P）中您可以进行抗原修复。这对于胚胎样本来说是不可能的，因为加热过程会破坏样本。如果PFA固定对整个组织不起作用，则抗体可能对蛋白质交联敏感，您将需要另一种固定剂。在优化整个组织块的染色步骤中，甲醇（例如，M116122）是第二常用的固定剂。

        斑马鱼胚胎的固定和准备需要额外的步骤以确保卵膜透化。

第 2 阶段  获取图像

       一些研究人员按原样查看并获取胚胎图像。在装片之前，可以漂浮在装有甘油缓冲液的培养皿中对整个胚胎进行成像。如果足够小，则可以将整个胚胎封固在甘油中，然后再放入盖玻片中。

       在这种情况下，应在盖玻片的拐角周围使用润滑脂，帮助将其固定到位。

       如果很难清楚地看到整个胚胎的染色情况（特别是在较大的晚期胚胎阶段或较大的组织样本），也可以将胚胎置于明胶中并切片。

       如果使用免疫荧光标记，那么共聚焦显微镜可以成为扫描胚胎的有用工具，而不是在染色后将整个胚胎切片到单独的载玻片上。

第3阶段  选择胚胎的年龄

       随着胚胎的生长，它会变得太大而无法染色。各种试剂，包括固定剂、抗体和显影液将无法渗透到样品的中心，并且染色细胞的数量导致想要获得清晰的图像变得非常困难。然而，如有必要，可以在染色之前将较大和较老的胚胎解剖成片段。

       推荐年龄：鸡胚胎，最长 6 天；小鼠胚胎，最长 12 天。

如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com/