末端脱氧核糖核酸转移酶 (TdT)

功能和特点
  • 表达系统: E. coli
  • Accession #: P06526
  • 生物活性: One unit is the amount of enzyme required to catalyze the incorporation of 1 nmol of dNTP to the 3'-OH termini of a polynucleotide within 60 minutes at 37℃.
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基本描述

产品名称 末端脱氧核糖核酸转移酶 (TdT)
别名 末端脱氧核苷酸转移酶 | DNA核苷酸基转移酶 | TdT酶
英文别名 TdT | DNTT | ‌ DNA nucleotidylexotransferase‌‌ | Terminal addition enzyme‌‌ | Terminal deoxynucleotidyltransferase‌‌ | Terminal transferase‌‌
规格或纯度 ActiBioPure™, 生物活性, EnzymoPure™, 无菌, 无DNA酶和RNA酶, 20 U/μL
产品介绍

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,简称TdT,中文名称为末端脱氧核糖核酸转移酶,是一种非模板依赖的DNA聚合酶,可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3'羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。有报道TdT也可以在RNA的3'羟基端加上NTP,但对于RNA的催化活性要弱于DNA。


用途

寡核苷酸或DNA 3'羟基末端标记;DNA末端加尾(DNA tailing);5'-RACE;合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。",


来源

由大肠杆菌表达,表达基因的来源为小牛胸腺。


酶储存溶液

100mM KAc (pH6.8), 2mM 2-mercaptoethanol, 0.01% (v/v) Triton X-100 and 50% (v/v) glycerol。ReactionBuffer (5X):0.125M Tris (pH7.2 at 25℃), 1M potassium cacodylate, 0.05% (v/v) Triton X-100, 5mMCoCl2。


失活或抑制

70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致TerminalDeoxynucleotidylTransferase失活。金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对TerminalDeoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。


注意事项

酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用说明

1.DNA 3'末端标记:a.参考如下表格设置反应体系:待标记DNA10 pmol of 3'-terminiReaction Buffer(5X)10μl[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol(3000Ci/mmol)1.85 MBq(50μCi)TdT(20U/μl)1-2μl补充无核酸酶的去离子水至50μlb.按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。c.37℃孵育20分钟。d.70℃孵育20分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。说明:标记的效率和3'羟基末端的类型有关,3'突出末端的标记效率要显著高于3'缩进末端或平末端的标记效率。2.DNA末端加尾(DNA Tailing):a.参考如下表格设置反应体系:DNA片断1 pmol of 3'-terminiReaction Buffer(5X)4μldATP or dTTP130pmol(20 μCi)或 dGTP or dCTP(四种中通常只需加入一种)(3000 Ci/mmol)60pmolTdT(20U/μl)0.5-1.5μl补充无核酸酶的去离子水至20μlb.按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。c.37℃孵育25分钟。d.70℃孵育25分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。说明:在上述反应条件下,每个3'羟基末端可以加上100-130个dA或dT,或20-30个dC或dG。3.其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。


生物活性 One unit is the amount of enzyme required to catalyze the incorporation of 1 nmol of dNTP to the 3'-OH termini of a polynucleotide within 60 minutes at 37℃.
表达系统 E. coli
种属 牛(Bovine)
Accession # P06526
来源 重组表达

产品规格参数

物理形态 液体
储存缓冲液 100mM KAc, 2mM 2-mercaptoethanol, 0.01% (v/v) Triton X-100 and 50% (v/v) Glycerol, pH6.8
浓度 20 U/μL
储存温度 -20°C储存,-80℃储存,避免反复冻融
运输条件 超低温冰袋运输
稳定性与储存 T751008A 长期储存-20℃(24个月);避免反复冻融。 T751008B 长期储存-80℃(24个月);避免反复冻融。
单位定义 37℃ 60分钟内,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
分子类型

安全和危险性(GHS)

质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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