200 units is defined as the amount of enzyme required to give 80% ligation of a 31-mer RNA to the pre-adenylated end of a 17-mer DNA in a total reaction volume of 20μl in 1 hour at 25℃.

生化机理

Repairs 3'-OH/5'-PO4 nicks in duplex RNA or RNA:DNA hybrid in which the broken 3'-OH strand is RNA (Probable) .The nick ligation reaction entails three nucleotidyl transfer steps. In the first step, the RNA ligase reacts with ATP in the absence of nucleic acid to form a covalent ligase-AMP intermediate and release pyrophosphate. In step 2, the ligase-AMP binds to the nicked duplex nucleic acid and transfers the adenylate to the 5'-PO4 terminus to form an adenylylated nicked intermediate. In step 3, the RNA ligase directs the attack of the nick 3'-OH on the 5'-phosphoanhydride linkage, resulting in a repaired 3' - 5' phosphodiester and release of AMP.

储存温度

-20°C储存,避免反复冻融

运输条件

超低温冰袋运输

产品介绍

本公司生产的 T4 RNA 连接酶 2 截短型（突变型）(T4 Rnl2tr KQ, or T4 Rnl2tr R55K, K227Q)，是 T4 RNA 连接酶 2 截短型的 R55K 和 K227Q 双点突变体，可以大大减少T4 RNA Ligase 2, truncated的对于RNA的非特异性连接(RNA的串联或自连成环)，并能保持和T4 RNA Ligase 2, truncated 相近的酶活性。T4 RNA Ligase 2, truncated KQ 是在 T4 RNA Ligase 2, truncated 的基础上将 227 位的赖氨酸和 55 位的精氨酸分别突变为谷氨酰胺和赖氨酸，K227Q 突变后大大降低了 T4 RNA Ligase 2, truncated 该酶所含有的轻微的从 5’预腺苷酰化的 DNA 接头(AppDNA)将腺苷基团转移到 RNA 5’磷酸基团同时形成 5’磷酸化 DNA 接头(pDNA)的活性，从而减少了 T4 RNA Ligase 2, truncated 导致的 RNA 非特异性连接(RNA 串联或自连成环)，但 T4 RNA Ligase 2, truncated K227Q 的连接酶活性有显著下降。在 T4 RNA Ligase 2, truncated K227Q 基础上进一步突变 R55K 后，酶的连接活性提升到了与野生型 T4 RNA Ligase 2, truncated 的连接活性相似的状态。T4 RNA Ligase 2, truncated KQ 与 T4 RNA Ligase 2, truncated具有类似的连接 ssRNA和AppDNA的效果，但T4 RNA Ligase 2, truncated能够使 AppDNA去腺苷酰化，形成pDNA，而T4 RNA Ligase 2, truncated KQ 对 AppDNA 不具有去腺苷酰化活性。T4 RNA Ligase 2, truncated KQ 常用于 microRNA (miRNA)等 3’端为羟基的单链 RNA 在克隆、高通量测序建库或 PCR 检测等时，在 3’羟基端添加 5’端预腺苷酰化的 DNA 或 RNA 接头。T4 RNA Ligase 2, truncated KQ 只能利用 5’端预腺苷酰化的单链 DNA 或 RNA 作为 3’端接头，因此可以大大降低连接反应的背景，通常是小 RNA 等建库时的优先选择。T4 RNA Ligase 2, truncated KQ 连接时不需要 ATP，但需要 5’端预腺苷酰化(也称预腺苷化、腺苷酰化或腺苷化)底物。

纯度（Purity）：无 DNA 内切酶和外切酶活性，无 RNA 酶活性，无蛋白酶活性。

组分和说明

T750875	Component	5KU	4*5KU	20*5KU	Storage
T750875A	T4 RNA Ligase 2, truncated KQ (200U/µl)	25µl	4*25µl	20*25µl	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
T750875B	10X T4 Rnl2tr KQ Buffer	75µl	4*75µl	20*75µl	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
T750875C	PEG8000 (50%, RNase free)	400µl	4*400µl	20*400µl	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品应用
5'末端预腺苷酰化的单链 DNA 或者 RNA 与单链 RNA 的 3'羟基末端连接；cDNA 文库构建中连接 5'末端预腺苷酰化单链寡核苷酸和小 RNA；链特异性的 cDNA 文库(strand-specific cDNA library)构建中连接 5'末端预腺苷酰化单链寡核苷酸和 RNA；二代测序中，miRNA 文库构建中 RNA 的 3'末端与接头之间的连接；cDNA 文库的构建以进行小 RNA 转录组分析(small-RNA transcriptome analysis)。
产品优势
T4 RNA Ligase 2, truncated KQ 常用于 microRNA (miRNA)等 3'端为羟基的单链 RNA 在克隆、高通量测序建库或 PCR 检测等时，在 3'羟基端添加 5'端预腺苷酰化的 DNA 或 RNA 接头。使用说明

1.用于连接 5'端腺苷酰化并且 3'端不是羟基的(例如为氨基)单链 DNA (AppDNA-NH2)和 3'端为羟基的单链 RNA (ssRNA)的使用说明具体如下。需要提前准备好待连接的样品，以及 Universal miRNA Cloning Linker 或自备的适当接头。

2.参考下表在冰浴中配制如下反应体系：

Reagent	Volume	Final Concentration
ssRNA	xµl	0.5 or 1µM
DEPC-treated Water	(4-x-y)µl	-
Universal miRNA Cloning Linker	yµl	1 or 0.5, or 2 or 1µM
PEG8000 (50%, RNase Free)	12µl	0.3
10X T4 Rnl2, truncated Buffer	2µl	1 X
RNase Inhibitor (40U/μl)	1µl	2U/μl
T4 RNA Ligase 2, truncated KQ (200U/µl)	1µl	10U/µl
Total Volume	20µl	-

注意：
a.由于涉及 RNA 操作，需要严格按照 RNA 操作的规范进行，避免 RNase 污染，相关试剂和耗材需要经过 DEPC 处理去除 RNase 或者确保是 RNase free 的。推荐在连接体系中添加 RNase Inhibitor，以避免 ssRNA 或其连接产物的降解，尽管经测试我们发现在严格操作的情况下，不加 RNase Inhibitor 也不会导致 ssRNA 或其连接产物发生明显降解。
b.进行连接反应时，如果样品 RNA 比较珍贵，希望充分被连接，可以按照接头和样品 RNA 的摩尔比为 2:1 的比例进行连接；如果样品RNA 比较充裕，同时感觉接头的成本偏高时，可以按照接头和样品 RNA 的摩尔比摩尔比 1:1 甚至 1:2 的比例进行连接反应，这样可以很好地节省接头。ssRNA 的用量可以根据实际的样品量进行适当调节，相应的接头的用量也按照比例进行适当调整即可。
c.如果同时进行多个连接反应，可以把上表中除 ssRNA 之外的所有溶液和酶提前预混合，然后再分装到各反应管内。
3.连接反应：25℃, 孵育 60min。为了使连接反应更加充分，可以适当延长连接反应时间。
4. 终止反应：65℃，孵育 20min。

保存条件：
-20℃保存，≤0℃运输
注意事项：
（1）本产品提供的试剂均用不含 DNA 酶和 RNA 酶的水配制，可直接用于 3'端为羟基的单链 RNA 和 5'端腺苷酰化的 DNA 或 RNA 之间的连接反应。
（2）可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如 RNase inhibitor、DEPC 水等。
（3）使用本产品连接 ssRNA 和 AppDNA 时，建议使用的 PEG8000 的浓度为 10%-30%，适当提高 PEG8000 的浓度，会显著提高 T4 RNA Ligase2, truncated KQ 的催化的连接效率，而不改变其反应特性。
（4）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
（5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

安全和危险性（GHS）

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

输入批号以搜索分析图谱:

溶液计算器

摩尔浓度计算器

计算溶液所需的质量、体积或浓度。

质量

浓度

体积

分子量

g/mol

稀释计算器

计算配制储备溶液所需的稀释度。

浓度1（C1）

体积 1 (V1)

浓度 2 (C2)

体积 2 (V2)

复溶计算器

复溶计算器允许您快速计算试剂的体积，以复溶小瓶。只需输入试剂的质量和目标浓度，计算器将确定其余部分。

体积（添加到小瓶中）

质量（小瓶）

所需的复溶浓度

T4 RNA 连接酶 2，截短突变型

库存信息

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基本描述

名称和识别符

安全和危险性（GHS）

质量标准

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

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