预甲基化清理板

过甲基化前聚糖的富集

应用：96孔板用于从糖蛋白中释放N-聚糖后去除多余的盐、洗涤剂、蛋白质和其他杂质。在对释放的聚糖进行透甲基化之前，该清洁板用于富集N-聚糖。

描述：96板是一个96孔膜底板，含有专门的聚糖结合膜。本产品设计用于可与其他流行真空歧管系统一起购买的真空歧管。酶促N-聚糖释放的杂质可以通过膜清洗，而聚糖则结合到膜上。富集的聚糖最终可以洗脱，并在全甲基化之前干燥。

样本数量：足以容纳96个样本。

样品体积：每孔最多350µL。

合适的样品：PNGaseF从糖蛋白中释放的任何未标记的聚糖或聚糖。

储存：室温储存。避免热源、光源和湿气。正确储存后，该板应在购买之日起36个月内保持稳定。

装运：产品应在环境温度下装运。

仅供研究使用。不适用于人类或药物使用。

所需的其他试剂和设备

有关真空歧管附件的完整列表，请参阅我们网站上的Velocity指南，或根据要求提供。

• 纯水：电阻率高于18 MΩ-cm，无颗粒（>0.22µM），TOC<10 ppb

• 70%乙醇溶液

• 乙腈（HPLC级）

• 1%甲酸

• 适用于96孔式SPE板的真空歧管

• 真空阱

• 用于收集聚糖的2 mL收集板

• 1.5 mL Eppendorf小瓶，用于干燥纯化的聚糖。

• 收集板盖（可选）

安全和处理

• 确保与本产品一起使用的任何玻璃、塑料器皿或溶剂不含环境碳水化合物。在所有样品处理程序中使用无粉末手套，避免污染环境碳水化合物。

• 一旦使用，应根据当地安全规则丢弃钢板。

96个样本的程序时间线

清理程序

1） 组装真空歧管

按照通常的程序组装当前的真空歧管系统，或者按照真空歧管系统提供的说明进行操作。在歧管内放置一个收集板或合适的容器来收集废物（通常需要一个空的移液管尖端盒）。将顶部放回歧管上，并将预透甲基化清洁板放在歧管顶部。

2） 清洁板的底漆/准备

用移液管将200µL 70%乙醇溶液移入用于润湿膜的板孔中。施加真空并调节至-0.05至-0.2巴，直到所有乙醇溶液都通过孔。打开水龙头以释放真空。用移液管将200µL水注入每个孔中以清洗膜。施加真空并调节至-0.05至-0.2巴，直到水全部通过井。用移液管将200µL乙腈注入每个孔中，以填充膜。施加真空并调节至-0.05至-0.2巴，直到乙腈全部通过孔。

3） 释放N-聚糖样品的制备

用移液管将280µL 100%乙腈移入每个样品中，并用移液器轻轻混合。

4） 将样品涂抹到板上

将每个样品装入板的涂有底漆的孔中。在不施加真空的情况下，使样品在板孔中沉淀5分钟。施加真空并调节至-0.05至-0.1巴，直到乙腈样品溶液全部通过孔。丢弃废物。

5） 洗掉非聚糖污染物

向每个含有样品的孔中加入200µL乙腈。施加真空并调节至-0.05至-0.1巴，直到乙腈全部通过孔。用200µL乙腈再洗两次，重复上述步骤。丢弃废物。

6） 洗脱富集的聚糖

在真空歧管内放置96孔收集板。组装歧管，使预渗透清理板位于顶部，确保收集板与井对齐。确保收集板和歧管顶部之间的距离尽可能小，以减少清洁板和收集板之间的间隙（可能需要垫片来提升收集板）。

向每个含有样品的孔中加入100µL 1%甲酸。施加真空并调节至-0.05至-0.1巴，直到液体全部通过孔。打开水龙头以释放真空。施加更高的真空（-0.5巴），以尽可能多地从井（和膜下方）中去除剩余的水。打开水龙头以释放真空。再次重复较高真空（-0.5巴）步骤。

向每个孔中再添加100µL 1%甲酸，以冲洗每个样品孔中剩余的N-聚糖。施加真空并调节至-0.05至-0.1巴，直到液体全部通过孔。打开水龙头以释放真空。施加更高的真空（-0.5巴），以尽可能多地从孔（和膜下方）中去除剩余的1%甲酸。打开水龙头以释放真空。再重复两次较高真空（-0.5巴）的步骤。这些真空步骤是为了尽可能多地从孔（和膜下面）中除去剩余的液体。

7） 转移并干燥样品

应将样品转移至1.5 mL Eppendorf瓶中，并使用离心蒸发器（约8小时）将样品完全降下。我们不建议在此阶段加热。只有使用高质量的真空离心机，因为长时间的干燥或加热可能导致聚糖脱分析。

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